细胞培养与转染适应性数据库/细胞因子精要概览
1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25％胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层，以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×103-6×103活细胞/ cm2。
6.37℃孵育培养细胞，传代培养细胞密度在6-7×104细胞/ cm2之间。
1.准备待转染细胞：按照A375细胞5×104/孔的密度接种于24孔板中，37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟，将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物：将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀，将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀；两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染：将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞（含培养基450 μL），复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时，转染6小时后可换新鲜培养基。
1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25％胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层，以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×103-6×103活细胞/ cm2。
6.37℃孵育培养细胞，传代培养细胞密度在6-7×104细胞/ cm2之间。
1.准备待转染细胞：按照Ca Ski细胞5×104/孔的密度接种于24孔板中，37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟，将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物：将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀，将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀；两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染：将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞（含培养基450 μL），复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时，转染6小时后可换新鲜培养基。
细胞培养步骤（T-75培养瓶）
常规传代培养操作
传代比例： 1:3-1:6
换液时间：一周2-3次
1.准备待转染细胞：按照Caki-2细胞5×104/孔的密度接种于24孔板中，37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟，将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物：将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀，将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀；两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染：将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞（含培养基450 μL），复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时，转染6小时后可换新鲜培养基。
1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25％胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层，以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×103-6×103活细胞/ cm2。
6.37℃孵育培养细胞，传代培养细胞密度在6-7×104细胞/ cm2之间。
1.准备待转染细胞：按照MRC-5细胞5×104/孔的密度接种于24孔板中，37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟，将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物：将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀，将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀；两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染：将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞（含培养基450 μL），复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时，转染6小时后可换新鲜培养基。
