操作步骤:
1. 细胞样品的准备:
a)对于贴壁细胞:
小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含EDTA的胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管
或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。
1000rpm左右离心5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适当延长离心时间或
稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬
细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。
b)对于悬浮细胞:
1000rpm左右离心5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适
当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃
预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。
2. 用去离子水按1:3稀释结合缓冲液(4ml 4x结合缓冲液+12ml去离子水);
3. 用1x结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1-5×10E6/ml;
4. 取100µl的细胞悬液于5ml流式管中,加入5µl Annexin V-PE混匀后于室温避光孵育5分钟;
5. 加入10µl 20ug/ml的7-AAD溶液,并加400µl PBS,立刻进行流式检测。