细胞传代培养步骤（T-75培养瓶）

1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25％胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层，以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×10³-6×10³活细胞/ cm²。
6.37℃孵育培养细胞，传代培养细胞密度在6-7×10⁴细胞/ cm²之间。

细胞转染步骤（Ultrafection2.0 , 以24孔板为例）

1.准备待转染细胞：按照HeLa细胞5×10⁴/孔的密度接种于24孔板中，37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟，将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物：将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀，将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀；两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染：将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞（含培养基450 μL），复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时，转染6小时后可换新鲜培养基。

细胞传代培养步骤（T-75培养瓶）

1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25％胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层，以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液，并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散（通常在5至15分钟内）。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基，轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×10³-6×10³活细胞/ cm²。
6.37℃孵育培养细胞，传代培养细胞密度在6-7×10⁴细胞/ cm²之间。

细胞转染步骤（Ultrafection2.0 , 以24孔板为例）

1.准备待转染细胞：按照HEp-2细胞5×10⁴/孔的密度接种于24孔板中，37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟，将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物：将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀，将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀；两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染：将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞（含培养基450 μL），复合物占总体积的1/10，轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时，转染6小时后可换新鲜培养基。

细胞培养步骤（T-75培养瓶）

1.接种细胞：4×10⁵悬浮细胞/ mL。

2.细胞密度达8×10⁵细胞/ mL进行继代培养（尽量不要超过2×10⁶细胞/ mL）。

细胞培养步骤（T-75培养瓶）

1.接种细胞数量：1×10⁵悬浮细胞/ mL。

2.细胞密度达8×10⁵细胞/ mL进行继代培养（尽量不要超过3×10⁶细胞/ mL）。

换液时间：2-3天