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细胞培养与转染适应性数据库/细胞因子精要概览


细胞种类筛选器

细胞系

原代细胞

A549 Cell

  • 种属
  • 组织来源肺脏
  • 形态学特征呼吸道上皮细胞
  • 培养特性贴壁生长

 

                                                     

                                 

推荐培养条件:F-12K+10%FBS

细胞传代培养步骤T-75培养瓶

1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25%胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层,以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液,并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散(通常在5至15分钟内)。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基,轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×103-6×103活细胞/ cm2
6.37℃孵育培养细胞,传代培养细胞密度在6-7×104细胞/ cm2之间。

推荐转染方法:阳离子聚合物转染

细胞转染步骤(Ultrafection2.0 , 以24孔板为例)

1.准备待转染细胞:按照A549细胞5×104/孔的密度接种于24孔板中,37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟,将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物:将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀,将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染:将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞(含培养基450 μL),复合物占总体积的1/10,轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时,转染6小时后可换新鲜培养基。

产品应用表现:FBS(Natocor)/Ultrafection2.0(4Abio)

HMEC ( Primary Mammary Epithelial Cells )

  • 种属
  • 组织来源肾胸腺
  • 形态学特征上皮细胞
  • 培养特性贴壁生长                         
推荐培养条件:Mammary Epithelial Cell Growth Medium+10%FBS

依据含特定生长因子添加物的培养基使用步骤培养

推荐转染方法:慢病毒转染/核转染
产品应用表现:FBS(Natocor)

HUVEC ( Primary Umbilical Vein Endothelial Cells )

  • 种属
  • 组织来源脐带
  • 形态学特征内皮细胞
  • 培养特性贴壁生长                         
推荐培养条件:Endothelial Cell Growth Medium+10%FBS

依据含特定生长因子添加物的培养基使用步骤培养

推荐转染方法:慢病毒转染/核转染
产品应用表现:FBS(Natocor)/Human VEGF(Shenandoah Biotechnology)

L929 Cells

  • 种属小鼠
  • 组织来源皮下结缔组织
  • 形态学特征成纤维样细胞
  • 培养特性贴壁生长                         
推荐培养条件:MEM+10%FBS

细胞传代培养步骤T-75培养瓶

1.移除并弃掉培养液。
2.用0.25%胰蛋白酶/0.53 mM EDTA溶液冲洗细胞层,以除去含胰蛋白酶抑制剂的痕量血清。
3.向培养瓶中加入2.0-3.0 mL胰蛋白酶EDTA溶液,并在倒置显微镜下观察细胞直至细胞层分散(通常在5至15分钟内)。
4.加入6.0-8.0 mL完全生长培养基,轻轻吹打吸出细胞。
5.将适当等份的细胞悬浮液加入新培养瓶中。推荐接种2×103-6×103活细胞/ cm2
6.37℃孵育培养细胞,传代培养细胞密度在6-7×104细胞/ cm2之间。

推荐转染方法:阳离子聚合物转染

细胞转染步骤(Ultrafection2.0 , 以24孔板为例)

1.准备待转染细胞:按照293细胞5×104/孔的密度接种于24孔板中,37 ℃培养过夜。
2.转染前30分钟,将待转细胞更换成新鲜培养基。
3.准备Ultrafection2.0/DNA复合物:将0.5 μg DNA溶于25 μL的无血清培养基中混匀,将1.5 μL Ultrafection2.0加入25 μL的无血清培养基中混匀两者混匀后室温孵育10分钟。
4.转染:将上述Ultrafection2.0/DNA复合物加入每孔细胞(含培养基450 μL),复合物占总体积的1/10,轻柔摇匀。37 ℃孵育24-48小时。必要时,转染6小时后可换新鲜培养基。

产品应用表现:FBS(Natocor)/Ultrafection2.0(4Abio)
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