流式细胞术
流式细胞术生物分析技术的突出特点是在单个细胞水平进行测定,可在同一细胞内同时检测两种或更多种细胞因子,可根据细胞免疫表型区分不同的细胞亚群,进行多参数相关分析。
与传统的荧光镜检相比,流式细胞术具有速度快、精度高、准确性好等优点,可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,成为当代先进的细胞定量分析技术。目前流式细胞术仪器和方法的日臻完善,它的应用范围也日益广泛,现已普遍用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学和生物化学等临床医学和基础医学研究领域。
随着单克隆抗体的发展,以及流式细胞仪检测方法的不断完善,采用流式细胞术不但可以对细胞表面的抗原和受体进行分析,对细胞内的抗原或分子也可以进行检测。现在细胞微球试验(CBA)技术的出现,使得流式细胞仪可以检测血清、血浆、培养液上清或其他体液中可溶性蛋白和细胞因子.
Bio-Plex 生物分析技术
Bio-Plex悬液芯片系统将先进的软件包、系统检验工具、微球耦联试剂和即用型细胞因子与磷酸化蛋白测试试剂整合在一起,使硬件、软件和检测试剂形成一个功能强大的芯片技术平台,大大提高了结果的精确性和可重复性,使用更加简便高效。该系统为蛋白与核酸研究人员提供了灵活的复合测试方案,可在单个样品中同时分析多达100个生物分子。利用100种不同颜色微球(xMAP技术)标记生物分子配体,每个微球可耦联一个对应不同靶分子的特异反应物。
免疫生物分析技术
细胞因子均为蛋白或多肽,具有较强的抗原性。随着重组细胞因子的出现,可较方便地获得细胞因子的特异性抗血清或单克隆抗体,因此可利用抗原抗体特异性反应的特性,用免疫学技术定量检测细胞因子,常用的方法包括ELISA、RIA及Western Blot 免疫印迹法。
尽管细胞因子种类繁多,只要获得了针对某一因子的特异性抗体(包括多克隆抗体或单克隆抗体)均可采用相似的技术开展工作。免疫学检测法可直接测定样品中特定细胞因子的含量(用ng/ml表示),为大规模检测临床病人血清中细胞因子的含量提供了方便。本法仅测定细胞因子的抗原性,与该因子活性不一定相平行,因此要了解细胞因子的生物学效应,必须结合生物学检测法。
使用不同的生物分析技术进行细胞因子检测,可能结果有些差异,且不同的检测方法各有优缺点,可以根据实验目的和实验室条件进行选择。在进行细胞因子检测时,应考虑到细胞因子的作用具有网络性的特点,需明确检测方法所测定的细胞因子成分,并考虑其抑制剂和可溶性受体的水平,将各种结合使用,有可能得到较为可靠的结果。