流式细胞术的实验检测对象是单细胞悬液。通常被测样品要求至少有20000个细胞,细胞浓度为105-107个/mL。
悬浮/贴壁细胞
悬浮细胞(贴壁细胞需经胰酶消化2-3min显微镜观察细胞有脱落趋势即刻弃去胰酶)直接收集细胞于离心管中。离心后收集沉淀,用PBS重悬,取适量细胞于EP管中,加入流式抗体后上样分析。
外周血
对于不含中心粒细胞的外周血单个核细胞(PBMC),采用Ficoll密度梯度离心;含中性粒细胞的外周血白细胞,先用红细胞裂解液(RBC)裂红,多次低速离心后去除红细胞碎片。
胸水、腹水、脑脊液等体液样品
将体液样本离心,弃上清后PBS重悬,加入流式抗体后即可上样分析。
实体脏器样品
先将脏器剪碎后用胰蛋白酶或胶原酶消化组织块:
胰蛋白酶适于消化细胞间质较少的软组织,如胚胎、上皮、肝、肾等组织。工作浓度一般为0.1%-0.5%,作用时间20-60min。
胶原酶适于纤维较多或较硬的癌组织,对组织中胶原蛋白类结构消化作用强。工作浓度一般为0.1-0.3 ug/mL,作用时间4-48hr。