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氧化应激分析

超氧化物歧化酶与氧化应激分析

2019-06-26 - 青木生物

超氧化物歧化酶(SOD)

 

       在氢离子与超氧化物发生反应生成过氧化氢和氧的过程中,SOD充当催化酶作用。人类线粒体中存在着含锰(Mn)的SOD(MnSOD),细胞浆则为含铜(Cu)、含锌(Zn)的SOD。目前还认为,SOD尚有存在于细胞外的其它三种类型。

 

      线粒体虽可代谢掉细胞中氧的95%以上,但因该处缺少组蛋白,故超氧化物等引起的氧化应激比较弱,而MnSOD将在此类防御机制中发挥重要作用。

 


      MnSOD与CuSOD、 ZuSODn不同,前者在面对应激时将表达增强。只是,在人类随着年龄的增加此作用消失,故认为MnSOD亦与老化有关。可见,MnSOD的意义正不断得到阐明,不过遗留下来的和老化、疾病相关的问题也不少。那么,都有哪些疾病与SOD表达/功能不全有着直接及间接的关系?这是今后应当积极研究的课题。


细胞氧化应激检测:

 

      在氧化应激过程中,由于受到自由基的氧化胁迫,构成细胞组织的各种物质如脂质、糖类、蛋白质、脱氧核糖核酸(DNA)等所有的大分子物质,都会发生各种程度的氧化反应,引起变性、交联、断裂等氧化 损伤,进而导致细胞结构和功能的破坏以及机体组织的损伤和器官的病变,甚至癌变等。

 

氧化应激的定量评价方法大致分做三类:

 

1)测定由活性氧修饰的化合物;

 

2)测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量;

 

3)测定含有转录因子的氧化应激指示物。

 

       而根据氧化应激的物质种类,又可主要分为蛋白质氧化损伤标志物检测、脂质过氧化标志物检测、核酸DNA/RNA损伤检测以及活性氧消除系统酶和抗氧化物质检测等。

 

蛋白质氧化损伤分析(Assay for Oxidative Protein Damage)

 

      在氧化应激过程中,自由基对蛋白质的作用包括蛋白质肽链断裂、蛋白质分子相互间交联聚合、蛋白质氨基酸发生氧化脱氨反应、氧自由基攻击蛋白质还原性 基团、脂类氧化裂解所产生的丙二醛与蛋白质上的氨基产生分子间的交联等。

 

       目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个,分别是蛋白羰基生成(羰基化)和二酪氨酸的生成(蛋白质中酪氨酸硝基化)。

 

脂质过氧化分析(Assay for Lipid Peroxidation)


      脂质过氧化现象在动物和植物中都会发生,并且已经被用作细胞和组织氧化应激下的反应标志物。脂质过氧化为ROS与生物膜的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链及核酸等大分子物质起脂质过氧化反应。

 

      形成脂质过氧化产物(lipid peroxide LPO)如丙二醛(MDA)和4-羟基壬烯醛(HNE),从而使细胞膜的流动性和通透性发生改变最终导致细胞结构和功能的改变。4-羟基壬烯醛(HNE)和丙二醛(MDA)是两个强毒力的脂质过氧化终产物常常是作为判断脂质过氧化的指标。