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基于细胞标志物的流式分析

流式细胞实验对照设计

2019-04-15 - 青木生物

未染色的细胞
确定背景和自发荧光的阴性对照;设置PMT电压。

完全染色的细胞
确定一些超出坐标轴的事件;设置PMT电压。

单染的细胞/微球
调节补偿

同型对照
设门,用于消除同类抗体的非特异性染色。每个抗体均会有不同水平的背景染色,这种背景与其结合特异性、抗体浓度、抗体聚集程度、荧光素:抗体比例等因素有关。挑选同型对照除了要选对物种、亚型,还需要看抗体的结合特异性、浓度等等各种因素

 

 

 

荧光扣除对照(FMO)
设门,用于消除荧光渗漏荧光的背景

多色实验时,要检测某个荧光通道的表达情况,由于荧光渗漏影响占主要,所以检测时先将该通道的抗体去掉,检测一下其它通道漏到此通道的背景荧光水平,进行正确排除,从而帮助设门。

未刺激或未处理的样本
实验阴性对照

阳性细胞(刺激或特殊药物处理过的)
实验阳性对照

用细胞活性染色(例如PI等)标记细胞
区分死、活细胞。